Процедура посіву на туберкульозну паличку і аналіз харкотиння



Посів на туберкульозну паличку здійснюється з метою виявлення туберкульозу у пацієнта. Основним методом діагностики даного захворювання є аналіз мокротиння, так як він вважається найбільш точним. Серед недоліків цього методу можна виділити терміни очікування результатів. Також для діагностики в якості матеріалу може використовуватися кров, сеча, слиз або кал.

Оцінка і облік результатів посіву матеріалів при туберкульозі

посів

Головною проблемою при діагностиці туберкульозу є тривалий час очікування результатів. Це пояснюється тим, що окремі види МБТ ростуть дуже довго (до трьох місяців). Зважаючи на це, посіви містять в термостаті протягом усього цього періоду.

Колонії МБТ мають різноманітний розмір і вид, розвиваються на щільних яєчних середовищах в вигляді R-форм. Їм притаманні колір слонової кістки і зморшкувата поверхню (якщо проводився курс хіміотерапії, то поверхня може ставати гладкою). В ході діагностики використовується ряд методик, які дають можливість відрізнити МБТ від інших видів мікобактерій і сапрофітів.

Ступінь зростання мікобактерій визначають з числа колонієутворюючих одиниць в матеріалах:

  • мізерна – якщо в аналізі виявлено до 20 КУО;
  • помірна – КУО більше 20, але менше 100;
  • рясна – КУО перевищує 100.

Для правильного трактування даних аналізу і планування курсу терапії важливо не тільки визначити, чи є в аналізах МБТ. Потрібно також визначити їх популяцію, склад, властивості, обсяг і її характер.

Зростання мікроорганізмів в посіві реєструють оптичним шляхом. У процесі свого розвитку мікобактерії споживають кисень, що призводить до зменшення його частки в пробірці. Відбувається посилення флюоресценції, після чого її можна спостерігати при опроміненні, а спеціальні датчики її реєструють. Після цього отримана інформація вноситься в комп’ютер і зберігається для подальшого аналізу кривих зростання.

З метою збільшення темпів зростання туберкульозних паличок використовується спеціальне середовище, основою для якої служить агар із застосуванням газової суміші і ростових добавок. Крім цього використовуються автоматизовані системи для культивації мікобактерій, застосування яких здатне скоротити терміни росту мікобактерій до 20 днів.

Вирощування чистих культур туберкульозної палички

бактерії



Виділення мікобактерій в штучних умовах важко. У посіві спостерігається незначне зростання, а самі культури утворюються протягом місяця. Вторинна бактеріальна флора, присутня в аналізі, розвивається швидше, ніж мікобактерії, внаслідок чого розвиток мікобактерій туберкульозу ускладнюється.

Туберкульозні палички нерухомі, спор і капсул не мають. Їх розмноження відбувається за допомогою розподілу і розпаду на зерна, з яких в подальшому розвиваються мікобактерії туберкульозу.

Серед основних способів вирощування чистих культур МБТ виділяють:

  • посів матеріалу на спеціальних яєчних середовищах;
  • обробка патологічного матеріалу за методом Гона.

При вирощуванні за методом Гона використовується сірчана кислота. В пробірку додається 10 см3 її розчину (при концентрації 10-15%), після чого вона струшується протягом 20 хвилин з метою досягнення гомогенізації. Далі пробірка поміщається на центрифугу, де знаходиться протягом 5 хвилин. Після закінчення процесу центрифугування залишають тільки осад, який розтирається і розмазується тонким шаром без промивання по поверхні заздалегідь підготовленої субстанції яєчного середовища.

Сірчана кислота не повинна впливати на досліджуваний зразок довше півгодини. В іншому випадку результати будуть некоректними.

Основою для живильного середовища, в яку додають посів туберкульозної палички, є яйця. Існує кілька варіантів її виготовлення: за методикою Виноградова, за методикою Любснау і за методикою Дорсе.

Два останніх методу відрізняються між собою лише тим, що в першому випадку використовується і жовток, і білок, а в другому – тільки жовток.

В іншому їх послідовність однакова:

пробірки

  • одна частина гліцеринового розчину, концентрацією 5%, додається до яйця;
  • посуд струшується до моменту досягнення гомогенізації;
  • проводиться фільтрація отриманої середовища за допомогою марлі;
  • отримана рідина наливається в пробірки по 5 см3;
  • пробірки з рідиною прогріваються в спеціальному апараті.

При проведенні приготувань до посіву, а також при зберіганні матеріалу слід дотримуватися ряду правил:

  1. Весь посуд, що використовується при приготуванні, обов’язково є стерильною.
  2. Марля, через яку пропускається розчин для фільтрації, також повинна бути стерильною.
  3. Зберігання матеріалів здійснюється в чистому, прохолодному і темному місці.
  4. Дробове згортання здійснюється за допомогою спеціального апарату на протязі триденного періоду (протягом години, в перший день при температурі 90 ° C, в два наступних – 70 ° C).
  5. З метою контролю вивчається субстанція повинна ще три дні перебувати в термостаті, а його температура встановлюється на рівень 37,5-38 ° C.

Аналіз мокротиння при діагностиці туберкульозу

При захворюваннях дихальної системи для встановлення діагнозу береться мокрота. Її аналіз дозволяє виявити наявність в ній мікобактерій туберкульозу. Якщо організм людини знаходиться в здоровому стані, то мокрота (секреція слизової оболонки бронхів) не виділяється.

Загальна інформація

мокрота

Початкова стадія захворювання на туберкульоз характеризується виділенням незначної кількості харкотиння (вона має слизисто-гнійний характер) або повною її відсутністю. Кашель пацієнта сухий і має низьку інтенсивність.

Небезпечним різновидом туберкульозу є кавернозна форма.

Це захворювання супроводжується руйнуванням кровоносних судин в організмі людини, а в мокроті часто зустрічаються:

  • рисові тільця (лінзи Коха);
  • кров;
  • різноманітні еластичні волокна і кристали.

Рівень білка в мокроті при захворюванні на туберкульоз значно вище, ніж при бронхіті.

Якщо кашель не проходить протягом тривалого періоду, слід звернутися за допомогою до лікаря. Не має значення, чи присутній в ньому мокрота чи ні, тому що туберкульоз має властивість прогресувати навіть при відсутності чітких симптомів.

Як правильно збирати мокротиння

Для більш достовірної діагностики слід дотримуватися таких правил, коли мокрота збирається на посів при туберкульозі:

  1. Збір повинен здійснюватися в спеціальний стерильний контейнер, який пацієнт може отримати в лабораторії.
  2. Перед збором мокротиння необхідно прополоскати рот або провести обробку зубів спеціальною пастою.
  3. Найкраще відхаркування проводити вранці на голодний шлунок. Цей період є оптимальним для збору, так як виділяється достатня кількість мокротиння.
  4. Аналізи повинні бути доставлені для лабораторних досліджень не більше ніж через дві години після збору.

Якщо мокрота була зібрана правильно, то вона носить слизисто-гнійний або слизовий характер. Її обсяг для досліджень повинен складати приблизно 3-5 мл.

Види мікобактерій туберкульозу

Збудником туберкульозу є кислотостійка мікобактерія.

Серед основних її видів виділяються:

мікробактерії

  1. Mycobacterium tuberculosis (людський вид).
  2. Mycobacterium africanum (проміжний вид).
  3. Mycobacterium bovis (бичачий вид).

Найчастіше туберкульозне захворювання у людини викликається першим видом (приблизно в 92% випадків). На два інших виду доводиться, відповідно, 5 і 3% випадків.

Тіло МБТ має форму палички, а розміри по довжині не більше 10 мкм при діаметрі близько 0,6 мкм. Туберкульозна паличка не має ядра, а основою для неї служить туберкулін, який нейтралізує захисні функції організму людини, спрямовані на боротьбу з нею.

Також цей вид мікроорганізмів здатний мутувати, щоб пристосуватися до середовища проживання. Якщо мікобактерії мутували, то процес лікування і виведення з організму ускладнюється. Клітинна структура і зовнішня оболонка ущільнюються. Основною особливістю даного виду мікроорганізмів є їх здатність жити і розвиватися в різноманітних умовах.

Загрузка...

Методи діагностики туберкульозу

Для визначення наявності у пацієнта захворювання на туберкульоз використовуються різні методики, серед яких найбільшого поширення набули:

лікар

  • туберкулінодіагностика;
  • рентгенологічні методи (до них відноситься флюорографія і рентгенографія);
  • бактеріологічний метод;
  • бактериоскопический метод;
  • стратегія DOTS;
  • виявлення при зверненні до лікаря.

При проведенні туберкулінодіагностики проводиться внутрішньошкірне введення туберкуліну (реакція Манту). Шкіра внутрішньої поверхні середньої третини передпліччя обробляється спиртовим розчином (концентрація 70%), після чого спеціальним туберкуліновим шприцом в шкіру пацієнта вводиться розчин.

Такий спосіб виявлення туберкульозу часто буває хибнопозитивних, тому необхідно провести повторний аналіз. Однак саме по первинній реакції можна виявити наявність МБТ в організмі людини.

На території Росії головним методом визначення туберкульозу є рентгенологія. Всі громадяни проходять її як мінімум 1 раз в 2 роки. Головною перевагою даного методу є пропускна здатність і мобільність. Флюорографічна плівка проявляється, проглядається, а дані за результатами огляду вносяться в спеціальні журнали.

Рентгенографія в основному проводиться після того, як один з методів діагностики дав позитивний результат. Крім того, цей спосіб ефективний, якщо лікар не може дати чітку відповідь, туберкульоз у пацієнта або пневмонія. Найчастіше проводиться пряма оглядова, бічна або поздовжня рентгенографія.

Підставою для проведення різних діагностик є висновок лікаря. Тому важливим методом виявлення туберкульозу на ранніх стадіях є первинне звернення до лікаря (необов’язково фтизіатра).

Всесвітня організація охорони здоров’я (ВООЗ) постійно стежить за ситуацією в світі по найбільш значущим захворювань, до яких відноситься і туберкульоз. Одним із способів боротьби з цим захворюванням є застосування стратегії DOTS. Суть її зводиться до проведення коротких курсів хіміотерапії, а ефективність становить не менше 85%. Крім того, дана методика найбільш економічна.

Проведення бронхоскопії

бронхоскопіяБронхоскопія – специфічний метод дослідження, при якому здійснюється огляд просвіту і слизової оболонки бронхів. Бронхоскопія є ендоскопічним методом дослідження і проводиться не тільки з лікувальною метою, а й з діагностичною.

Ця процедура застосовується в тому випадку, якщо мокротиння не виділяється під час кашлю. Вона проводиться за допомогою спеціального обладнання. Бронхоскоп має м’яку, рухливу трубочку, діаметр якої становить від 2 до 6 мм. На її кінці кріпиться джерело світла і камера, яка передає зображення на монітор. Апарат вводиться через рот або ніс пацієнта в дихальні шляхи, а доктор має можливість на екрані спостерігати за дихальними шляхами хворого.

Розрізняють два види бронхоскопії:

  • ригидная (проводиться із застосуванням загальної анестезії, тому перед початком цієї процедури пацієнт консультується у анестезіолога);
  • фибробронхоскопия (застосовується місцевий наркоз).

Бронхоскопія дозволяє оцінити не тільки мокроту, взяти її для аналізу, але і видалити з органів дихання. Перед проведенням процедури не можна вживати їжу і рідини не менше 6 годин.

Дослідження зразка відбувається за бактеріологічним методом. Це дозволяє виявити в аналізах свідоцтва процесу розпаду легких – мікобактерії, кристали холестерину, солі кальцію і еластичні волокна. Якщо було виявлено негативний посів в результаті дослідження при туберкульозі, аналіз проводиться повторно.

бактеріоскопічні дослідження

лаборантПісля збору діагностичного матеріалу, його готують для подальших аналізів. В основі бак посіву лежить реакція мікобактерій на фуксин, який перетворює їх колір в червоний. Вміст розтирається між стеклами таким чином, щоб площа мазка займала не більше 2/3 поверхні. Потім препарат розміщується над пальником, щоб він убрався при нагріванні.

Аналіз дозволяє виявити МБТ дуже швидко, але тільки при достатній концентрації в зразку мазка. Необхідно, щоб концентрація мікобактерій на 1 мл мокротиння становила хоча б 100 тисяч, в іншому випадку тест може показувати помилково негативні результати.

Бактеріоскопічний аналіз має підвищену чутливість, тому пацієнт повинен дотримуватися всіх правил збору мокротиння.

Незалежно від виду бактеріоскопії, фтизіатр вказує у своєму висновку такі пункти:

  • які форми МБТ були знайдені в мазку;
  • який вид МБТ присутній в мазку;
  • яка кількість МБТ було виявлено в мазку.

Бактериоскопия проводиться як мінімум три рази, щоб мати впевненість у її результатах. Найефективнішими способами вважається люмінесцентна і фазово-контрастна мікроскопія.

В основі першої лежить реакція туберкульозної палички на ультрафіолетове випромінювання (завдяки цьому, аналіз харкотиння проходить швидше). Друга дає можливість спостерігати мікобактерії наживо, що дозволяє встановити більш точний діагноз, однак дана процедура є дорогою.

Діагностика за допомогою ПЛР

лабораторіяПолімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) – метод пошуку вірусів в організмі за допомогою генної інженерії, розроблений в 1983 році. Він дозволяє не тільки виявити захворювання, а й виявити біологічний матеріал. З матеріалу хворого виділяють фрагменти частинок ДНК вірусу, після чого визначають клас мікроорганізму.

До плюсів ПЛР відносяться:

  • швидкість виявлення вірусів в аналізі (всього за 3,5-5,5 годин);
  • висока точність постановки діагнозу навіть на початковій стадії розвитку хвороби;
  • для дослідження підходить будь-яка біологічне середовище, в якій може бути присутнім збудник;
  • для проведення аналізу використовується мала кількість матеріалу.

Головним мінусом такої діагностики є її ціна, тому при туберкульозі її проводять не так часто. ПЛР при туберкульозному захворюванні здійснюють тільки у випадках неможливості поставити точний діагноз іншим методом.

Серед інших мінусів цієї діагностики відзначається її неефективність, якщо туберкульозна паличка мутувала, а також необхідність правильного вибору діагностичного матеріалу для дослідження (наприклад, при туберкульозі органів нервової системи немає сенсу брати для аналізу мокротиння). Також після закінчення лікування в організмі людини будуть присутні мертві мікобактерії, а ПЛР в такому випадку дає хибнопозитивний результат.

Діагностика за допомогою ПЛР при туберкульозному захворюванні здійснюється в чотири етапи:

  1. Збір необхідного матеріалу для дослідження (кров, харкотиння і так далі).
  2. Вплив на діагностичний матеріал за допомогою високих температур для руйнування структури ДНК.
  3. Зниження температури під час відпалу для утворення зв’язку між праймером (частина ДНК, що бере участь в біосинтезі) і відокремленої на минулому етапі ланцюгом ДНК.
  4. Біологічний синтез молекул.

Достатня кількість копій ДНК мікобактерій утворюється після 25-30 таких циклів.

Багато людей останнім часом відмовляються від проходження професійних оглядів і вакцинації, що підвищує ризик поширення туберкульозної інфекції серед населення. В таких умовах ПЛР діагностика є ключовим методом, який дозволяє виявляти в найкоротші терміни і найбільш інформативно наявність мікобактерій туберкульозу в організмі.

Чи можна вилікувати туберкульоз?

таблетки

Ще кілька років тому відповіддю на це питання було однозначне «Так», але особливості мікобактерій створюють додаткові складності при лікуванні. МБТ мутують і пристосовуються до впливу препаратів, тому при діагностиці важливо точно визначити тип мікобактерій і їх реакцію на вплив лікарських засобів.

Для повного лікування туберкульозу пацієнту необхідно дотримуватися ряду умов:

  • чітко дотримуватися графіку прийому препаратів, вказаною лікарем;
  • не робити перерв в курсі лікування навіть при відчутті, що туберкульоз відступив.

Туберкульоз – небезпечне смертельне захворювання, найчастіше носить латентний характер, тому потрібно уважно підходити до процесу лікування. Сучасні способи лікування і застосовуються препарати дозволяють впоратися з цією недугою.

Загрузка...

Be the first to comment

Leave a Reply

Your email address will not be published.


*