ПЛР на туберкульоз – порівняно молодий, але результативний і комплексний метод виявлення інфекції. Туберкульоз – небезпечне інфекційне захворювання, яке характеризується високим рівнем смертності. Діагностоване на ранній стадії, воно успішно піддається лікуванню. Аналіз ПЛР на туберкульоз дозволяє оперативно виявити захворювання і негайно почати лікування. Це підвищує шанси хворого на повне одужання без виникнення ускладнень.
Загальний опис методу
ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) як метод діагностики захворювань – винахід американського вченого К. Мулліса, який отримав за нього Нобелівську премію в 1993 році. Суть методу полягає в копіюванні ДНК мікроорганізмів з досліджуваного біоматеріалу в довгі ланцюжки для подальшої ідентифікації.
Весь процес діагностики цим методом проводиться в три етапи:
- Забір біоматеріалу.
- Синтез молекул ДНК.
- Розшифровка результату.
Процес ампліфікації вимагає суворого дотримання необхідних параметрів. Тому від лаборанта потрібно максимум уваги і акуратності.
Реакція запускається в ампліфікаторі – спеціальній камері, в якій під впливом температур і різних ферментів відбувається виявлення патогенної ДНК і штучне добудовування її в довгі ланцюжки.
У ампліфікаторі відбуваються складні хімічні реакції:
- денатурація – роз’єднання ланцюга ДНК на два ланцюжки під впливом високої температури (98 град. Цельсія), яке триває близько двох хвилин;
- отжиг – зниження температури до 56 град. Цельсія для зв’язку праймера з ниткою ДНК;
- елонгація – на цьому етапі синтезуються необхідні молекули ДНК.
Ці етапи циклічно повторюються, і в підсумку виходять ланцюжка ДНК молекул-збудників, якщо вони присутні в досліджуваному матеріалі.
збір біоматеріалу
Аналіз ПЛР є досить складною процедурою, в якій відхилення від корисних властивостей може фатально вплинути на результат. Тому потрібно з усією серйозністю поставитися до підготовки досліджуваного біоматеріалу.
Як досліджуваної середовища вибирається будь-яка біологічна рідина:
кров;
- сеча;
- мокрота;
- змивна рідина з бронхів;
- зішкріб з будь-якого органу;
- рідина спинного мозку;
- мазки з статевих органів.
Підготовка до здачі аналізу ПЛР на туберкульоз залежить від обраного біоматеріалу.
Якщо це кров, то пацієнт повинен дотримуватися загальних правил підготовки до здачі аналізу: не приймати їжу більше 8 годин, не курити, не вживати алкоголь, не приймати лікарські препарати.
Якщо це мокрота, то збирати її потрібно в ранкові години після ретельного туалету порожнини рота. Увечері необхідно прийняти муколітичний засіб для поліпшення відходження мокроти.
Сеча збирається в стерильну ємність і також в ранкові години перед вживанням їжі та медикаментів. Збору сечі повинно передувати умивання.
Деякі препарати (наприклад, антибіотики, гепарин) чинять негативний вплив на достовірність результату аналізу. Тому за два тижні до проведення дослідження методом ПЛР слід виключити їх застосування.
Решта видів біоматеріалу здаються тільки в умовах стаціонару або поліклініки. Наприклад, кров для аналізу після збору в стерильний шприц повинна знаходитися в спеціальних умовах, що не дозволяють їй згорнутися. А спинномозкову рідину зможе зібрати лише кваліфікований фахівець в лікарні.
Інтерпретація результату аналізу
На підставі результатів проведеного аналізу лікар дає висновок, який може бути як простим, так і розширеним. Простий результат видає один з двох параметрів: наявність або відсутність збудника. Розширений метод, крім позитивного результату, визначає додаткові параметри – вогнище і ступінь поширення, – які дозволяють призначити більш ефективне лікування.
При дослідженні методом ПЛР живі і мертві мікроорганізми не розрізняються, і результат після лікування деякий час буде позитивним. Тому повторне дослідження лікар призначає приблизно через місяць після закінчення терапії.
Достовірну трактування результату може дати тільки лікар-фтизіатр.
Записи висновків виглядають наступним чином:
- позитивний результат – «Mycobacterium tuberculosis»;
- негативний результат – «Mycobacterium tuberculosi не виявлені» або «виявлено недостатню кількість детектіруемих частинок».
Також існує хибнопозитивний результат. У цьому випадку або виявляються нежиттєздатні збудники, або аналіз проводився з порушенням технології.
Переваги та недоліки методики
На сьогоднішній день ПЛР діагностика на туберкульоз займає перше місце по використанню в порівнянні з іншими методами виявлення цього захворювання. Досвід використання аналізу ПЛР говорить як про переваги, так і про недоліки.
З огляду на всі плюси і мінуси ПЛР діагностики, слід взяти до уваги інші види досліджень. Також рекомендується провести додаткові тести для отримання повної і достовірної картини стану організму.
До переваг методу відносяться:
- Висока точність. Наявність навіть невеликої кількості мікобактерій в біоматеріалу дозволяє виявити захворювання.
- Оперативність. Час, який витрачається на дослідження, включаючи збір біологічної рідини, становить не більше 5 годин. Інші методи, наприклад, посів культури, змушують чекати результат від 10 днів до місяця.
- Безпека для пацієнта. Особливо актуально це для дітей. Флюорографічне дослідження небезпечно опроміненням, а для хворих на туберкульоз, знімки потрібно робити періодично.
- При ПЛР діагностики можна досліджувати будь-яку біологічне середовище, в тому числі зішкріб з будь-якого органу, що дозволяє виявити локальні вогнища інфекції. При туберкульозі легенів на аналіз береться мокротиння, при підозрі на туберкульозний менінгіт досліджують спинномозкову рідину. Аналіз крові і сечі менш достовірний в зв’язку з тим, що в цих середовищах збудники можуть бути відсутні при місцевих формах туберкульозу.
- Крім виявлення наявності захворювання, діагностика інформує про чутливість мікобактерій до антибіотиків, що спрощує призначення лікування.
- Можливість діагностики захворювання на ранньому етапі його розвитку, навіть до появи перших симптомів.
Висока точність. Наявність навіть невеликої кількості мікобактерій в біоматеріалу дозволяє виявити захворювання.До недоліків ПЛР діагностики слід віднести високу вартість обладнання, неможливість оцінити ефективність лікування відразу після його закінчення і ймовірність мутації збудників, яка може спровокувати хибнопозитивний результат.
Показання для проведення діагностики
Діагностика туберкульозу методом ПЛР не має протипоказань, але є випадки, коли цей вид дослідження залишається єдино можливим.
І ось ці ситуації:
- Неоднозначність симптоматики ускладнює постановку діагнозу. Наприклад, важкі ураження легень, що супроводжуються сильним кашлем і присутністю крові в мокроті.
- Контакт з хворим на туберкульоз.
- Вагітність.
- Екстрені випадки. Наприклад, майбутня операція.
- Сумнівна реакція на пробу Манту, а також алергічні реакції на компоненти туберкуліну.
- Дитячий вік.
- Неможливість діагностування захворювання іншими методами при наявності явних симптомів.
- ВІЛ інфекція.
Неоднозначність симптоматики ускладнює постановку діагнозу. Наприклад, важкі ураження легень, що супроводжуються сильним кашлем і присутністю крові в мокроті.Для пацієнтів з імунодефіцитом метод ПЛР є провідним. Інші методи для таких хворих дають недостовірний результат або неповну інформацію про стадію захворювання.
Напрямок для проведення діагностики методом ПЛР можуть видати терапевт, пульмонолог, фтизіатр, педіатр (для дітей). Після проведення аналізу, який показав наявність інфекції, лікуванням займається тільки лікар-фтизіатр. Він дає висновок, ставить діагноз, призначає додаткове обстеження і спостерігає за станом пацієнта аж до одужання.
Альтернативні методи діагностики туберкульозу
Альтернативні методи діагностики туберкульозу не втратили своєї актуальності і після впровадження ПЛР. Вони затребувані в разі відсутності можливості проведення діагностики методом ПЛР, і, якщо результат аналізу, виконаний цим методом, викликає сумніви.
Існують наступні способи виявлення захворювання:
- Візуальний огляд та опитування хворого.
- Тест на туберкульоз (проба Манту).
- Флюорографія або рентген.
- Бактеріологічне дослідження біоматеріалу на флору.
Ці методи діагностики доступні кожному пацієнтові.
Захворюваність на туберкульоз щорічно зростає, ще швидше зростає смертність від цієї недуги. Тому кожному необхідно пам’ятати про профілактичні заходи, що дозволяють як максимум не заразитися туберкульозом і як мінімум виявити хворобу вчасно. Вибір методу діагностики при цьому залишається за пацієнтом.
Вищевказані методи не дають повністю достовірного результату і мають ряд недоліків:
- симптоми, виявлені під час огляду і опитуванні пацієнта, дають лише приблизні варіанти стану хворого. Ці дані визначають хід подальшого обстеження;
- використання тестів на туберкульоз має багато протипоказань і вимагає дотримання конкретних правил. У числі протипоказань варто відзначити алергічну реакцію, спокій від інших щеплень понад тридцять днів, захворювання шкіри. Після введення туберкуліну місце уколу не можна чіпати, мочити – ці умови важко створити для дітей;
- флюорографічне дослідження загрожує опроміненням, що неприпустимо для вагітних, дітей, людей з ослабленим імунітетом або імунодефіцитом;
- бактеріологічне дослідження проводиться досить довго. Очікування результату може затягнутися на місяць.
симптоми, виявлені під час огляду і опитуванні пацієнта, дають лише приблизні варіанти стану хворого. Ці дані визначають хід подальшого обстеження;Ці процедури підходять скоріше для підтвердження відсутності інфекції в організмі і мають більше профілактичну спрямованість. Якщо ж є найменша підозра на зараження, то найкращим методом діагностики, безсумнівно, буде діагностика методом ПЛР.
Діти і туберкульоз
Дітей необхідно особливо берегти від зараження, тому що інфекція роками може не проявляти жодних ознак, але вже негативно позначається на здоров’ї незміцнілого зростаючого організму малюка.
Пізніше відбувається швидка зміна стадій захворювання:
- Латентна стадія, що триває до року. Ділиться на дві фази. Перша характеризується відсутністю симптомів і негативною реакцією на пробу Манту. Друга фаза дає позитивний результат на пробу Манту.
- Туберкульозна інтоксикація. Симптоматика більш виражена на цій стадії захворювання. З’являються млявість, апатія, поганий апетит, підвищена стомлюваність, анемія, збільшення лімфовузлів, можливе збільшення печінки і селезінки, незначне і стабільне підвищення температури, зниження тонусу м’язової тканини. Триває цей період недовго.
- Первинна туберкульозна форма. Ознаками цієї стадії є виникнення вогнища запалення в місці локалізації інфекції, лімфаденіт, запалення лімфовузлів в зоні поширення інфекції. У дитини починаються головні болі, прогресує кашель і задишка.
- Туберкульозний бронхоаденіт. Стадія характеризується кашлем зі звучанням в два тони, болем в лопатках, шумі на видиху. Ці симптоми виникають через запалення лімфовузлів, що знаходяться в легенях.
Латентна стадія, що триває до року. Ділиться на дві фази. Перша характеризується відсутністю симптомів і негативною реакцією на пробу Манту. Друга фаза дає позитивний результат на пробу Манту.Ефективним методом профілактики дитячого туберкульозу є щеплення БЦЖ. Перший раз дитину щеплять в пологовому будинку. Вакцина містить неактивні бактерії бичачого туберкульозу, і дає стійкий імунітет майже на 7 років. Також не варто нехтувати банальної гігієною після знаходження дитини в громадських місцях.
До одного із способів виявлення захворювання відносять тест на туберкульоз, або пробу Манту, який застосовується у дітей 1-15 років щорічно. При цьому під шкіру вводиться деяка кількість зруйнованих туберкульозних паличок. Якщо в організмі дитини присутній інфекція, то місце уколу стає сильно запалених і нагадує бляшку.
Іншим способом діагностики є ПЛР діагностика. При наявності протипоказань до введення тесту на туберкульоз і при підозрі на захворювання цей аналіз стає незамінним видом дослідження для дитини.
Найчастіше у дитини беруть на аналіз кров в зв’язку зі складністю забору іншого матеріалу. У виняткових випадках заходи зі збору необхідних біоматеріалів все ж організовуються. Чутливість аналізу нижче, ніж у дорослих: 25-83% у дітей проти 90-100% у дорослого.
При найменших підозрах на туберкульоз у дитини необхідно якомога швидше з’ясувати, чи інфікований він. Найбезпечнішим і простим методом діагностики є аналіз методом ПЛР. Своєчасність вжитих заходів запобіжить ускладнення, а може бути, врятує дитині життя.
До додаткових заходів по виявленню туберкульозу у дітей відносять взяття загального аналізу крові. На початковій стадії цей аналіз буде неінформативним. Але прогресуючий з часом туберкульоз поступово призводить до змін стану крові: підвищується кількість еритроцитів, сегментоядерних нейтрофілів, базофілів; відбувається зменшення кількості лімфоцитів (приблизно на 20%), підвищується ШОЕ, періодично змінюється кількість еозинофілів то в більшу, то в меншу сторону. Досвідчений лікар за цими параметрами може запідозрити у дитини наявність інфекції і призначить додаткове обстеження. Тому не можна нехтувати проведенням щорічних медичних оглядів у дітей.
Незважаючи на колосальний прогрес в науці, сучасна медицина до сих пір не змогла побороти високий рівень захворюваності на туберкульоз та смертності від нього. Тому профілактичні заходи попередження туберкульозу та контроль випадкового зараження повинні стати звичними як для дітей, так і для дорослих.